بهینه سازی توالی ژن رنین گاوی و تهیه سازه ژنی مناسب برای تولید کیموزین در مخمر Pichia pastoris | ||
| مجله علوم و صنایع غذایی ایران | ||
| Article 33, Volume 15, Issue 81, 1397, Pages 399-412 PDF (1.22 M) | ||
| Authors | ||
| سهیلا محب زاده1; ناصر زارع* 2; رسول اصغری ذکریا3; بهرام فتحی آچاچلویی4 | ||
| 1گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی | ||
| 2عضو هیات علمی- دانشگاه محقق اردبیلی | ||
| 3عضو هیات علمی گروه زراعت و اصلاح نباتات کشاورزی، دانشگاه محقق اردبیلی | ||
| 4گروه صنایع غذایی، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی، دانشگاه محقق اردبیلی | ||
| Abstract | ||
| کیموزین حیوانی بـه عنـوان موثرترین آنزیم برای تولید پنیر مطرح است که این امر به دلیل کیفیت بسیار مناسب بافت و عطر و طعم پنیر تولید شده میباشد. با توجه به تقاضای روز افزون نسبت به این آنزیم نیاز است در کنار سایر منابع گیاهی و میکروبی از منابع نوترکیب نیز برای تولید این آنزیم استفاده گردد. در این پژوهش به منظور تولید نوترکیب کیموزین، و نیز بهبود بیان ژن کیموزین گاوی در مخمر، ابتدا توالی ژن کیموزین بر اساس کاربرد کدونی (Codon usage) مخمر پیچیا پاستوریس بهینهسازی و سنتز گردید. پس از بهینهسازی توالی نوکلئوتیدی، شاخص انطباق کدونی (CAI) از 59/0 به 72/0 افزایش پیدا کرد در حالیکه، توالی ژنی 83% با توالی بهینه شده مطابقت داشت. تعداد کدونهای نادر با فراوانی کمتر از 10% قبل از بهینهسازی 41 عدد بود که پس از بهینهسازی هیچ کدونی با فراوانی کمتر از 10% یافت نشد. به منظور انتقال ژن کیموزین A به وکتور بیانی pPIC9 مخمری، ژن سنتز شده کیموزین با استفاده از آغازگرهای اختصاصی تکثیر و در وکتور PTG-19 همسانهسازی گردید. کلونیهای نوترکیب از طریق روش غربالگری کلونیهای سفید-آبی گزینش شدند. ژن کیموزین با استفاده از آنزیمهای Not I و EcoR I از وکتور PTG19-chymA برش داده شده و در وکتور pPIC9 برش یافته با همان آنزیمها همسانه گردید. کلونیهای نوترکیب pPIC9-chymA با استفاده از تکنیک کلونی PCR شناسایی و انتخاب شدند. ماهیت نوترکیبی و درج صحیح ژن کیموزین در وکتور بیانی مخمری pPIC9 از طریق استخراج پلاسمید و برش با آنزیم برشی BamH I مورد تایید قرار گرفت. | ||
| Keywords | ||
| کیموزین نوترکیب; همسانهسازی ژن; آنزیم لختهکننده شیر | ||
|
Statistics Article View: 245 PDF Download: 148 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,196 |
| Number of Articles | 24,880 |
| Article View | 28,805,460 |
| PDF Download | 18,606,438 |