ترنسداکشن پایدار ترنسژن GFP در سلول سخت ترنسفکت ماکروفاژ موشی RAW264.7 با استفاده از وکتورهای نسل دوم لنتی ویروس | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 5, Volume 16, Issue 2 - Serial Number 45, Winter 1404, Pages 58-74 PDF (1.17 M) | ||
| Authors | ||
| منیر سلاطی1; منصور عباچی2; مجید صادقی زاده1; حمید رضا سلیمانپور لیچایی* 3 | ||
| 1دانشگاه تربیت مدرس | ||
| 2پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری | ||
| 3، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری | ||
| Abstract | ||
| مقدمه: سلولهای ماکروفاژی، دستهای از سلولهای سختترنسفکت میباشند که بدلیل اهمیت هدفگیری آنها در استراتژیهای درمانی، پیادهسازی یک روش موفق ترنسفکشن در آنها همواره مدنظر میباشد. مواد و روشها: کارایی وکتورهای لنتیویروسی در مقایسه با سه ترکیب تجاری Xfect™ Transfection Reagent، FuGENE® HD و Lipofectamine TM 3000 در ترنسفکشن سلول ماکروفاژی RAW264.7 بررسی گردید. بعد از بهینهسازی و تولید ذرات ویروسی در سلول 293T، آلودهسازی سلولی با MOIهای متفاوت صورت گرفت و میزان کارایی ترنسداکشن، زندهمانی و فعالیت متابولیک سلولها اندازهگیری و با روشهای شیمیایی مقایسه گردید. نتایج: هیچیک از سه ترکیب شیمیایی تجاری قادر به ترنسفکت موفق RAW264.7 نشدند در حالیکه روش ویروسی در کمترین غلظت نیز قادر به ترنسداکشن سلولها و ایجاد سیگنال سبز رنگ در زیر میکروسکوپ فلورسنت گردید. تغلیظ استوک ویروسی و بکارگیری MOIهای بیشتر تا 30 بطور معنیداری (p≤0.0001) باعث افزایش راندمان ترنسداکشن گردید. بحث: روش ترنسفکشن لنتیویروسی علی رغم کار زیاد و زمان طولانیتر در مقایسه با روشهای شیمیایی جهت ترنسفکشن سلولهای سختترنسفکت کارایی بالاتری دارد که در این تحقیق انجام برخی اصلاحات نظیر تغلیظ ویروس، عدم فریز ویروسها، استفاده از پلیبرن و انکوباسیون شبانه سلولها با ذرات ویروسی کارایی آنرا افزایش داد. از آنجا که پارامترهای مهم دیگری مانند استفاده از رترونکتین و سانتریفوژ چند ساعته ویروس و سلول در کنار هم (اسپینوکولیشن)، بر روی فرایند آلودهسازی ویروسها بسیار موثرند، پیشنهاد میشود در مطالعات بعدی مدنظر قرارگرفته و با توجه به دادههای امیدوارکننده این تحقیق، از این روش تکمیلی برای ترنسداکشن دیگر سلولهای سختترنسفکت مانند سلولهای بنیادی یا سلولهای اولیه نیز استفاده شود. | ||
| Keywords | ||
| ترنسفکشن; ترنسداکشن; RAW264.7; سلول سخت ترنسفکت; وکتور لنتی ویروس; MOI | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 229 PDF Download: 115 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,171 |
| Number of Articles | 24,674 |
| Article View | 24,436,414 |
| PDF Download | 17,551,414 |