کلونینگ، بیان و تخلیص دیابادی Anti-PDL-1 – Anti- CTLA-4 در میزبان E.coli با استفاده از تگ pelB | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 3, Volume 15, Issue 1 - Serial Number 40, 1402, Pages 33-49 PDF (664.97 K) | ||
| Document Type: پژوهشی اصیل | ||
| Authors | ||
| یعقوب fathollahi1; بهاره دبیر منش* 1; خسرو خواجه1; عاطفه خداکرمی2 | ||
| 1عضو هیت علمی | ||
| 2دانشجوی دانشگاه | ||
| Abstract | ||
| نقاط بازرسی ایمنی، مولکول هایی هستند که سیستم ایمنی را تنظیم میکنند. برخی از سلول های تومور می توانند لیگاندهای متصل شونده به این نقاط بازرسی ایمنی را برای فرار از پاسخ های ایمنی ضد توموری بیان کنند. برخی از عوامل، مانند آنتی بادی ها، می توانند این نقاط بازرسی را مهار کنند. هدف از این مطالعه بیان یک دیابادی دو منظوره جدید در فضای پری پلاسمیک باکتری E. coli BL21(DE3) برای مهار همزمان دو نقطه بازرسی ایمنی، پروتئین مرتبط با ۴ (CTLA 4) و لیگاند متصل شونده (PD L1) است. دیابادی دو منظوره بر اساس ژن نواحی متغیر آنتیبادیهای anti PD-L1 و anti CTLA 4 طراحی و جهت بیان درباکتری E. coli BL21(DE3) بهینه سازی و در پلاسمید بیانی pET21 کلون شد. پس از ترنسفرم کردن به داخل سویه بیانی E. coli BL21(DE3) اثر شرایط بیانی مختلف کشت مورد بررسی قرار گرفت، بیانDia-21 با وزن مولکولی ۵۵کیلو دالتون با الکتروفورز ژل SDS-PAGE و وسترن بلات تأیید شد. بهترین شرایط برای بیان پری پلاسمیک به فرم محلول بیان با 0/5 میلی مولار IPTG در دمای 23 درجه سانتی گراد محیط کشتLB و زمان ۱۸ ساعت به دست آمد. پروتئین بیان شده سپس با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل آگارز با بازده نهایی 0/4 میلی گرم در لیتر تخلیص و نهایت میل ترکیبی برهمکنش پروتئین خالص شده توسط Cell-ELISA بررسی شد. پروتئین دیابادی نوترکیب در یک سیستم باکتریایی بیان و خالصسازی و برهمکنش پروتئین دیابادی نوترکیب باگیرنده سطح سلولی PDL-1 از طریق Cell-Elisa بررسی شد. | ||
| Keywords | ||
| نقاط بازرسی; دیابادی; CTLA-4; PDL-1 | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 197 PDF Download: 89 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,171 |
| Number of Articles | 24,674 |
| Article View | 24,431,570 |
| PDF Download | 17,549,997 |