غربالگری و شناسایی باکتریهای تجزیه کننده سلولز از خاک و کلون سازی ژن مربوط به آنزیم اندوگلوکاناز | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 3, Volume 14, Issue 2 - Serial Number 37, 1402, Pages 52-68 PDF (1.2 M) | ||
| Document Type: پژوهشی اصیل | ||
| Authors | ||
| آرزو معرفت; لیلا صادقی* ; غلامرضا دهقان | ||
| گروه علوم جانوری، دانشکده علوم طبیعی، دانشگاه تبریز، تبریز | ||
| Abstract | ||
| امرزه استفاده از بیوکاتالیستها در صنعت اهمیت فراوانی دارد. چون آنها واکنشهای شیمیایی را با صرف کمترین انرژی و بالاترین بازده انجام میدهند. در این بین آنزیمهای باکتریایی با توجه به روش آسان کلونسازی و بیان بالای پرتئینها در میزبان قابل دستورزی اهمیت خاصی دارند. آنزیم سلولاز فراوانترین پلیمر موجود در طبیعت را به واحدهای گلوکز هیدرولیز میکند. گلوکز تولید شده از این روش میتواند کاربردهای متنوع داشته باشد از جمله تولید سوخت زیستی، شیرین کننده در صنایع غذایی و تولید اتانول. با توجه به کاربرد گسترده این آنزیم، در سالهای اخیر کلونسازی و تولید آن در میزبانهای دستورزی شده گسترش یافته است. این مطالعه به منظور جداسازی، غربالگری و شناسایی سویههای بومی تولید کننده آنزیم اندوگلوکاناز از نمونههای خاک اطراف ریشه درخت افرا در منطقه شمال کشور انجام شد. سویههای جدا شده با استفاده از توالی یابی ژن 16S rRNA شناسایی شدند. پس از شناسایی نوع باکتری(Enterobacter hormaechei) ، تکثیر ژن آنزیم اندوگلوکاناز ابتدا توسط آغازگرهای دژنره و سپس توسط آغازگرهای اختصاصی دارای توالیهای برشی انجام شد و الحاق ژن در پلاسمید مناسب با استفاده از آنزیمهای برشی و الحاقی مناسب صورت گرفت. سپس پلاسمید نوترکیب حاصل به میزبان E.coli BL-21 منتقل شد و بیان پروتئین هدف با تحریک اوپران لک در غلظت mM 1 IPTG انجام گرفت. ثابتهای کینتیکی آنزیم از جمله Vmax و Km به ترتیب برابر با 45 میکرومول در دقیقه و 4/1 میلیگرم در میلی لیتر محاسبه گردید. بهینه شرایط فعالیت آنزیم نوترکیب تولید شده در دمای °C37 و pH 7 میباشد. | ||
| Keywords | ||
| سلولز; کربوکسی متیل سلولز; غربالگری; آنزیم اندوگلوکاناز; آغازگر دژنره; انتروباکتر هورمایچی | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 229 PDF Download: 101 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,171 |
| Number of Articles | 24,674 |
| Article View | 24,431,430 |
| PDF Download | 17,549,929 |