تشخیص نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ B به روش ساندویچ الایزا | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 9, Volume 13, Issue 2 - Serial Number 33, 1401, Pages 133-146 PDF (307.03 K) | ||
| Document Type: پژوهشی اصیل | ||
| Authors | ||
| حسین سمیعی ابیانه1; شهرام نظریان* 2; جعفر امانی3; امیر سجاد حجتی رزجی4; محمدرضا رمضانی5; محمد رضا رحمانی6 | ||
| 1گروه بیوتکنولوژی پزشکی و نانوتکنولوژی ، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران. | ||
| 2دانشیار، گروه زیستشناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران | ||
| 3استاد ، مرکز تحقیقات بیولوژیمولکولی، پژوهشکده سیستم بیولوژی مسمومیتها، دانشگاه علوم پزشکی بقیها... (عج) ، تهران، ایران | ||
| 4کارشناسی ارشد، گروه زیستشناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران | ||
| 5دکتری تخصصی، گروه زیستشناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین(ع)، تهران، ایران | ||
| 6گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین، تهران، ایران. | ||
| Abstract | ||
| زمینه و هدف: سموم بوتولینوم (BoNTs) جزء کشندهترین ترکیباتی هستند که تاکنون شناختهشده و عامل بیماری بوتولیسم میباشند. در حال حاضر، تشخیصBoNT در غذا به استفاده از سنجش زیستی روی موش آزمایشگاهی است که یک روش بسیار حساس (محدوده تشخیص pg mL-1 7 تا 20) اما زمانبر میباشد. این روش سریع، اختصاصی و می تواند حساسیتی معادل آزمایش روی موش آزمایشگاهی دارد. هدف از این تحقیق استفاده از روش ساندویچ الایزا جهت شناساییBoNT/B بود. مواد و روشها: پروتئین نوترکیب 370 اسید آمینهای از انتهای کربوکسیل بخش اتصالدهنده سم BoNT/B با وزن مولکولی 45 کیلودالتون به عنوان آنتیژن بیان و به روش کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA خالصسازی شد. آنتیبادی IgG از سرم موشی و خرگوشی با روش کروماتوگرافی تمایلی رزین پروتئین G جداسازی و به روش SDS-PAGE و آزمون الایزا ، تائیدشد. حساسیت و اختصاصیت روش طراحیشده جهت تشخیص آنتیژن نوترکیب BoNT/B-HcC و توکسوئید بوتولینوم تایپ B ارزیابی شد. نتایج: غلظت آنتیبادی موشی و خرگوشی تخلیص شده به ترتیب 3 و 5/4 میلیگرم از هر میلیلیتر سرم بود. حداقل غلظت پروتئین قابل شناسایی به روش الایزا غیر مستقیم با آنتی بادی تخلیص شده موشی و خرگوشی 475 و 118 پیکوگرم تعیین شد. با بهینه سازی روش ساندیچ الایزا حداقل30 نانوگرم از آنتیژن نوترکیبBoNT/B-HcC و 146 پیکوگرم ازBoNT/B با اختصاصیت بالا شناسایی شد. نتیجهگیری: روش ساندویچ الایزای طراحی شده می تواند برای شناسایی دقیق و حساس سم کلستردیوم بوتولینوم تیپ B مورد استفاده قرار گیرد. لازم است در آینده کارآیی این روش برای تشخیص سم بوتولینوم در نمونههای محیطی و غذایی ارزیابی گردد. | ||
| Keywords | ||
| ساندویچ الایزا; نوروتوکسین بوتولینوم تایپ B; کلستردیوم بوتولینوم; آنتی بادی | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 353 PDF Download: 117 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,196 |
| Number of Articles | 24,877 |
| Article View | 28,765,392 |
| PDF Download | 18,602,868 |