قویمی, ارد, حاجی حسن, زهرا, ارمغان, فاطمه (2022). کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن. , 12(2), 103-119.
ارد قویمی; زهرا حاجی حسن; فاطمه ارمغان. "کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن". , 12, 2, 2022, 103-119.
قویمی, ارد, حاجی حسن, زهرا, ارمغان, فاطمه (2022). 'کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن', , 12(2), pp. 103-119.
قویمی, ارد, حاجی حسن, زهرا, ارمغان, فاطمه کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن. , 2022; 12(2): 103-119.

کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن

زیست فناوری
Article 8, Volume 12, Issue 2 - Serial Number 29, 1400, Pages 103-119    PDF (758.67 K)
Document Type: پژوهشی اصیل
Authors
ارد قویمی1; زهرا حاجی حسن* 2; فاطمه ارمغان1
1گروه مهندسی علوم زیستی، دانشکده علوم و فنون نوین، دانشگاه تهران
2گروه مهندسی علوم زیستی، دانشکده علوم و فنون نوین دانشگاه تهران
Abstract
اکتیوین A یکی از اعضای خانواده‌ی فاکتور رشد تغییردهنده‌ی بتا (TGF-β) است که نقش مهمی در فرآیندهای فیزیولوژیکی متعدد همانند تمایز سلولی، ترمیم بافتی، رگ زایی، تمایز سلول های بنیادی، چسبندگی سلولی و آپوپتوز دارد. لذا با توجه به کاربردهای بالینی متعدد این پروتئین، تولید نوترکیب آن سودمند می‌باشد.از آنجاییکه اشرشیاکلی یکی از محبوب ترین میزبان ها برای تولید پروتئین‌های نوترکیب است، در این تحقیق از بیان سیتوپلاسمی در این سویه به منظور تولید مقادیر بالایی از اکتیوین A استفاده گردید. بدین منظورابتدا cDNA ناحیه‌ی بالغ ژن اکتیوین A تکثیر و در وکتور (+)pET28a کلون گردید. وکتور حاصل به سویه‎های (DE3)BL21، plysS(DE3)BL21 و Rosetta gami (DE3)BL21 انتقال داده شد. پس از القای پروموتر با استفاده از IPTG و بیان پروتئین، تولید اکتیوین A به وسیله‌ی روش های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. نتایج نشان داد که بیان اکتیوین A در سیتوپلاسم هر سه سویه یک رویکرد موثر برای دست‌یابی به میزان بالایی از پروتئین نوترکیب است اما در این بین، سویه (DE3)BL21 مقدار بیشتری پروتئین تولید کرده است. در مرحله ی بعد به منظور دست یابی به شکل محلول اکتیوین A از بیان همزمان چپرون‌های سیتوپلاسمی TF، GroEL/ES و DnaK/J با وکتور (+)pET28a که حامل اکتیوینA بود استفاده شد. نتایج SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داد که بیان همزمان اکتیوین A با استفاده از پلاسمید چپرونی pGro7 که دارای چپرون های GroEL و GroES می‌باشد، در سویه‌ی(DE3)BL21 یک رویکرد مؤثر برای تولید پروتئین اکتیوین A محلول است.
Keywords
اشرشیاکلی; پروتئین نوترکیب; پروتئین محلول; اکتیوین A
References
Statistics
Article View: 173
PDF Download: 90
Statistics
Number of Journals45
Number of Issues2,160
Number of Articles24,577
Article View19,959,628
PDF Download16,091,015