فتحی, زهرا, مشهدی اکبر بوجار, مسعود, دهنوی, احسان, حسن ساجدی, رضا (2020). کلون سازی و بیان دُمین خارج سلولی رسپتور 2 VEGF انسانی در پیکیا پاستوریس و بررسی خواص اتصالی آن. , 11(1), 93-102.
زهرا فتحی; مسعود مشهدی اکبر بوجار; احسان دهنوی; رضا حسن ساجدی. "کلون سازی و بیان دُمین خارج سلولی رسپتور 2 VEGF انسانی در پیکیا پاستوریس و بررسی خواص اتصالی آن". , 11, 1, 2020, 93-102.
فتحی, زهرا, مشهدی اکبر بوجار, مسعود, دهنوی, احسان, حسن ساجدی, رضا (2020). 'کلون سازی و بیان دُمین خارج سلولی رسپتور 2 VEGF انسانی در پیکیا پاستوریس و بررسی خواص اتصالی آن', , 11(1), pp. 93-102.
فتحی, زهرا, مشهدی اکبر بوجار, مسعود, دهنوی, احسان, حسن ساجدی, رضا کلون سازی و بیان دُمین خارج سلولی رسپتور 2 VEGF انسانی در پیکیا پاستوریس و بررسی خواص اتصالی آن. , 2020; 11(1): 93-102.

کلون سازی و بیان دُمین خارج سلولی رسپتور 2 VEGF انسانی در پیکیا پاستوریس و بررسی خواص اتصالی آن

زیست فناوری
Article 12, Volume 11, Issue 1 - Serial Number 24, 1398, Pages 93-102    PDF (406.62 K)
Document Type: پژوهشی اصیل
Authors
زهرا فتحی1; مسعود مشهدی اکبر بوجار1; احسان دهنوی2; رضا حسن ساجدی* 3
1گروه علوم سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی
2گروه پژوهشی پیشگامان انتقال ژن، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی
3گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس
Abstract
آنژیوژنز[1] غیرطبیعی با بیماری­های مختلف نظیر سرطان و متاستاز آن، رتینوپاتی و آرتریت روماتوئید در ارتباط است. VEGF-A[2] مهمترین واسطه­ی آنژیوژنز در میان تمام فاکتورهای رشد است. فعالیت زیستی VEGF توسط دو گیرنده تیروزین کینازی VEGFR-1 و VEGFR-2 سلول­های اندوتلیال وساطت می­شود. سیگنالینگ VEGF از طریق VEGFR-2 مسیر اصلی آنژیوژنز است که منجر به تحریک رشد سریع سلول­های اندوتلیال به داخل تومور می­شود. این رسپتور از یک بخش خارج سلولی، یک بخش سیتوپلاسمی و یک دُمین ترانس ممبران تشکیل شده است. بخش خارج سلولی متشکل از هفت دُمین شبه ایمونوگلوبولین (D1-D7) است که دُمین های اول تا سوم به عنوان جایگاه اتصال لیگاند عمل می­کنند. در این مطالعه دُمین های خارج سلولی 3-1 گیرنده (KDR1-3) بصورت نوترکیب در Pichia pastoris بیان شد. یک قطعه DNA 975 نوکلوتیدی حاوی دُمین های 3-1 براساس توالی نوکلئوتیدی در GenBank و توالی پروتئین در Swiss-Prot طراحی شد. وکتور بیانی ترشحی نوترکیب (pPinkαHC/KDR1-3) ساخته شد و به روش الکتروپوریشن به داخل مخمر منتقل شد. سلول های نوترکیب با بیان بالا از طریق تکمیل اگزوتروفی آدنین شناسایی و کشت شدند. KDR1-3 تحت القا با متانول 1٪ بیان و با SDS-PAGE و تکنیک وسترن بلات تایید شد. پس از تخلیص با کروماتوگرافی تمایلی با رزین Ni-NTA، اتصال محصول بیان شده به hVEGF165 با الایزای مستقیم و الایزای مبتنی بر گیرنده اثبات شد. نتایج نشان داد که دُمین خارج سلولی 3-1 گیرنده VEGFR-2 انسانی با ساختار پروتئین یوکاریوتی، که هیچ گزارشی در مورد آن وجود ندارد، با موفقیت بیان شد.


[1] Angiogenesis

[2] Vascular endothelial growth factor-A
Keywords
رگ‌زایی; فاکتور رشد اندوتلیال رگی (VEGF); گیرنده فاکتور رشد اندوتلیال رگی-2 (VEGFR-2); پیکیا پاستوریس
References
Statistics
Article View: 193
PDF Download: 74
Statistics
Number of Journals45
Number of Issues2,160
Number of Articles24,577
Article View19,975,839
PDF Download16,098,568