مقایسه پایداری ترمودینامیک و بازتاخوردگی سینتیک آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی و برخی جهشیافتههای آن | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 12, Volume 9, Issue 3 - Serial Number 18, 1397, Pages 417-425 PDF (903.25 K) | ||
| Authors | ||
| زهرا سلگی1; خسرو خلیفه2; سامان حسینخانی3; بیژن رنجبر* 1 | ||
| 1گروه بیوفیزیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران | ||
| 2گروه زیستشناسی، دانشکده علوم، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران | ||
| 3گروه بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران | ||
| Abstract | ||
| اهداف: احتمال برقراری میانکنشهای الکتروستاتیک بهعلت فراوانی رزیدوهای باردار آبدوست بهویژه آرژنین بهعنوان مهمترین فاکتور پایدارکننده دمایی آنزیمهای گرمادوست مطرح شده است. هدف این مطالعه، مقایسه پایداری ترمودینامیک و بازتاخوردگی سینتیک آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی و برخی جهشیافتههای آن بود. مواد و روشها: در مطالعه تجربی حاضر، پایداری گرمایی و نحوه بازتاخوردگی آنزیم لوسیفراز گونه ایرانی لامفیریس ترکستانیکوس و ۳ جهشیافته ERR, ERR/I۲۳۲R, ERR/Q۳۵R/I۱۸۲R/I۲۳۲R توسط تکنیکهای مختلف اسپکتروسکوپی بررسی شد. بهمنظور بیان بالای پروتئینها یک تککلونی از هر یک از نمونهها انتخاب و به ۱۰میلیلیتر محیط کشت LB دارای کانامایسین با غلظت ۵۰میکروگرم بر میلیگرم تلقیح و در دمای C°۳۷ و با هوادهی مطلوب بهمدت ۱۵-۱۲ ساعت انکوبه شد. بهمنظور تهیه محتوای سلولی از باکتریها، محیط کشت القاشده بهمدت ۵ دقیقه در ۵۰۰۰گرم و دمای C°۴ سانتریفوژ شد. نتایج از طریق مطالعات با روشهای طیفسنجی دورنگنمایی دورانی در ناحیه دور، نزدیک و فلورسانس ذاتی، مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی (DSC) و آزمایشهای سینتیکی با استفاده از تکنیک جریان متوقف مبتنی بر فلوئورسانس به دست آمد. یافتهها: همراه با افزایش تعداد رزیدوی آرژنین در سطح پروتئین، پایداری و فشردگی ساختاری آنزیمهای جهشیافته در مقایسه با آنزیم وحشی افزایش یافته و ترموگرامهای حاصل از مطالعات کالریمتری روبشی تفاضلی نیز بیانگر افزایش اندکی در Tm و آنتالپی کالریمتری پروتئینهای جهش یافته نسبت به پروتئین وحشی بودند. نتیجهگیری: ثابت سرعت بازتاخوردگی آنزیمهای جهشیافته نسبت به نوع وحشی افزایش پیدا کرده است. بهبود پارامترهای ترمودینامیک و سینتیک ناشی از بهبود میانکنشهای الکترواستاتیک است که منجر به درجه بالاتری از فشردگی و تراکم ساختاری میشود. | ||
| Keywords | ||
| لوسیفراز; کالریمتری روبشی تفاضلی; دورنگنمایی دورانی; فلورسانس جریان متوقف; ترمودینامیک; سینتیک | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 215 PDF Download: 88 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,162 |
| Number of Articles | 24,582 |
| Article View | 20,477,901 |
| PDF Download | 16,303,336 |