تولید رده نوترکیب HEK293T با بیش- بیانی پایدار miR-1 بهعنوان مدل زیستی برای مطالعات قلبی | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 1, Volume 9, Issue 1 - Serial Number 16, 1396, Pages 1-8 PDF (1.05 M) | ||
| Authors | ||
| مهسا راسخی1; بهناز بخشنده* 2; مجید صادقی زاده3; علی سلیمی 4; مسعود سلیمانی 5 | ||
| 1پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران | ||
| 2گروه بیوتکنولوژی، دانشکده علوم، دانشگاه تهران، تهران، ایران | ||
| 3گروه ژنتیک، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
| 4مرکز تحقیقات نانوبیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی بقیهاله(عج)، تهران، ایران | ||
| 5گروه هماتولوژی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
| Abstract | ||
| اهداف: القای مصنوعی بیش- بیان miRNA راهکار مناسبی برای القای موثرتر تمایز سلولی است. نقش موثر miR-۱ در تکوین و تمایز سلولهای قلبی گزارش شده است. لنتیویروس یک ناقل کارآمد برای تهیه ردههای سلولی پایدار است. هدف پژوهش حاضر تولید رده سلولی با بیش- بیان پایدار miR-۱ برای ایجاد یک مدل زیستی برای مطالعات قلبی بود. مواد و روشها: در پژوهش تجربی حاضر، سلولهای HEK ۲۹۳T در محیط کشت DMEM بههمراه سرم جنین گاوی (FBS) ۱۰% و ال- گلوتامین ۲میلیمولار و پنیسیلین- استرپتومایسین ۱X در محیط انکوباتور کشت داده شدند. پس از کلونکردن ژن miR-۱، کلونهای نوترکیب انتخاب شدند و حضور قطعه ژنی در وکتور نوترکیب با توالییابی تایید شد. وکتور حامل miR-۱ بههمراه وکتورهای کمکی در سلولHEK۲۹۳T بهصورت ویروس نوترکیب بستهبندی شد. تراآلایی سلولهای HEK۲۹۳T با ویروس نوترکیب برای تولید رده پایدار انجام شد. سپس کارآیی تراآلایی و رقت موثر ویروس با نشانگر GFP سنجش شد. تغییرات بیان miR-۱ با روش qPCR بررسی شد. تحلیل دادهها از طریق بررسی مقایسهای چرخه آستانه و روش Pfaffl انجام گرفت. یافتهها: بیشترین میزان بیان GFP مربوط به سلولهای آلودهشده با رقت ۱۵۰میکرومولار بود. نشانگر فلورسنت GFP موجب تسهیل فرآیند بهینهسازی و تخلیص سلولهای نوترکیب شد. در ارزیابی qPCR، بیان miR-۱ در سلولهای تراآلایی شده در مقایسه با سلولهای گروه کنترل افزایش قابل ملاحظهای داشت. نتیجهگیری: رده سلولی پایدار نوترکیب HEK۲۹۳T بیش- بیانکننده miR-۱ در لنتیویروس، بهعنوان مدل زیستی مناسب برای بررسی فرآیندهای تکامل و تکوین قلب است. | ||
| Keywords | ||
| microRNA-1; سلولهای HEK293T; تمایز سلولی; تراآلایی ویروسی سلول; مدل زیستی | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 276 PDF Download: 134 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,196 |
| Number of Articles | 24,877 |
| Article View | 28,766,380 |
| PDF Download | 18,602,968 |