بهینهسازی رمزه و مقایسهی بیان فاکتوررشد اکتیوین A بصورت نوترکیب در میزبانهای باکتریایی BL21(DE3) ، BL21(DE3)pLysS وRosetta gami BL21(DE3) | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 7, Volume 7, Issue 1 - Serial Number 12, 1395, Pages 50-60 PDF (1.79 M) | ||
| Authors | ||
| زهرا حاجی حسن* 1; سید کاظم حسینی2; علیرضا زمردی پور3 | ||
| 1هیات علمی دانشگاه تهران | ||
| 2کارشناس ارشد فارغ التحصیل از دانشکده علوم و فنون نوین دانشگاه تهران | ||
| 3هیات علمی پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری | ||
| Abstract | ||
| پروتئین اکتیوینA متشکل از دو دایمر βA بصورت یک پری-پرو-پروتئین با طول 426 آمینواسید سنتز می شود که پس ازحذف بخشهای پری و پرو، پروتئین بالغ با طول 116 آمینواسید حاصل میشود. این پروتئین که اولین بار از مایع فولیکولی گوسفند بعنوان یک محرک قدرتمند برای تولید هورمون FSH جداسازی شد، دارای عملکردهای گوناگونی مثل حفظ و بقای سلول های عصبی، آپوپتوز، رشد و تمایز در انسان می باشد. از آنجاییکه پروتئین اکتیوینA دارای کاربردهای متعددی در زمینه پزشکی مانند تمایز سلول های بنیادی، ترمیم زخم، درمان بیماری های تحلیل عصبی مانند آلزایمر و ...است برای اولینبار در این تحقیق در سه سویهی متفاوت باکتری E.coli بیان شد. از آنجاییکه پروتئین مذکور در ساختار فعال و عملکردی خود دارای پیوندهای دیسولفیدی است، محیط احیا کنندهی سیتوپلاسم E.coli برای بیان آن مناسب نمیباشد لذا، محیط اکسید کنندهی پریپلاسم جهت تولید آن همراه با تاخوردگی صحیح مورد توجه قرار گرفت. در این تحقیق، cDNA ژن اکتیوین A انسانی بدست آمده از بانک اطلاعاتی NCBI پس از بهینهسازی رمزه به همراه پپتید نشانه تغییریافته آنزیم آلفا آمیلاز باکتری باسیلوس لیکنی فورمیس بومی ایران در وکتور بیانی pET21b(+)، ساب کون و سپس به روش ترنسفورماسیون به سویههای BL21(DE3)pLysS ،BL21(DE3)Rosetta gami و BL21(DE3) انتقال یافت. پس از بیان همزمان با استفاده از القاگر IPTG ، محتوای پروتئینی استخراج شده از هر سه سویه با استفاده از تکنیکهای SDS-PAGE ، دات بلات و وسترن بلات با یکدیگر مقایسه گردید. نتایج نشان دهنده بیان در هر سه سویه باکتریایی بویژه در Rosetta gamiو DE3 می باشد. | ||
| Keywords | ||
| اکتیوین A; پپتید نشانه آنزیم آلفا آمیلاز | ||
|
Statistics Article View: 186 PDF Download: 58 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,160 |
| Number of Articles | 24,576 |
| Article View | 19,915,862 |
| PDF Download | 16,073,344 |