گردانه, موسی, دهشکار گونه فراهانی, نفیسه, مقصودی, نادر, عطار, حسین, رحیمی شم آبادی, عباس, قریب, احسان (2011). تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی. , 2(1), -.
موسی گردانه; نفیسه دهشکار گونه فراهانی; نادر مقصودی; حسین عطار; عباس رحیمی شم آبادی; احسان قریب. "تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی". , 2, 1, 2011, -.
گردانه, موسی, دهشکار گونه فراهانی, نفیسه, مقصودی, نادر, عطار, حسین, رحیمی شم آبادی, عباس, قریب, احسان (2011). 'تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی', , 2(1), pp. -.
گردانه, موسی, دهشکار گونه فراهانی, نفیسه, مقصودی, نادر, عطار, حسین, رحیمی شم آبادی, عباس, قریب, احسان تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی. , 2011; 2(1): -.

تولید لنتی ویروسهای نوترکیب ناقل ژن فاکتور نوروتروفیک GDNF با تیتر بالا و انتقال آنها به آستروسیتهای انسانی

زیست فناوری
Article 3, Volume 2, Issue 1 - Serial Number 2, 1390    PDF (2.1 M)
Authors
موسی گردانه* 1; نفیسه دهشکار گونه فراهانی2; نادر مقصودی3; حسین عطار3; عباس رحیمی شم آبادی4; احسان قریب2
1اتوبان تهران-کرج- بلوار پژوهش- پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک
2دانشجو
3عضو هیئت علمی
4کارشناس
Abstract
لنتی ویروسها از جمله موثرترین ویروسهای نوترکیب برای انتقال ژن به سلولها و بافتهای پستانداران بشمار میرود. این مطالعه شامل دو بخش اساسی است: (1) بررسی کارائی ستونهای پروتئینی در تولید لنتی ویروسهای نوترکیب با تیتر بالا و (2) بکارگیری این ستونها درتولید لنتی ویروسهای نوترکیب حامل ژن فاکتورنوروتروفیک GDNF. در بخش اول مطالعه با استفاده از دو ناقل انتقال (حامل GFP یا Jred) تولید لنتی ویروس نوترکیب کردیم. با انتقال سوپرناتان سلولهای ترانسفکت شده به ستونهای پروتئینی Amicon و سانتریفوژ ستونها بیش از 99% سوپرناتان را جدا کردیم تا استوکی در حجم 500 μl از سوپرناتان غلیظ شده و مملو از ویریونها بدست آید. با افزودن رقتهای مختلف این استوک ویروسی به سلولهای هدف، ترانسدوکشن سلولی با موفقیت انجام شد بطوریکه ترانسژنهای گزارشگر در 100% سلولها مشاهده شد. متقابلا تست بخش رقیق سوپرناتان منجر به هیچگونه بیان ژن که نشانگر فعالیت ویروسی باشد نگردید. تولید تیتر بالای ویروسی با روش فیلتراسیون مزبور برای انتقال موفقیت آمیز ژنها اهمیت دارد و از نظر هزینه، حجم کار و زمانبری بر آنها ارجحیت دارد. در بخش دوم این مطالعه، توالی مربوط به فاکتور مهم GDNF را به سازه لنتی ویروسی پیوند زده و به همان روش بالا ویروسهای تیتر بالا تولید کردیم. با انتقال این ویروسها به آستروسیتهای انسانی توانستیم افزایش بیان ژن GDNF را در سطح mRNA بمیزان 3 برابر بدست آوریم. این نتایج نشان دادکه لنتی ویروسهای حامل GDNF را میتوان با روش جاری در تیتر بالا تولید کرده و برای مطالعات تمایزی و حفاظت نورونی مورد استفاده قرار داد.
Keywords
انتقال ژن; لنتی ویروس; ستونهای پروتئینی; فاکتور نوروتروفیک
Statistics
Article View: 194
PDF Download: 98
Statistics
Number of Journals45
Number of Issues2,171
Number of Articles24,672
Article View24,384,150
PDF Download17,531,361