بهینه سازی فعالیت آنزیم اندوگلوکاناز Cel9A از باکتری آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس با روش رویه پاسخ (RSM) | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 9, Volume 7, Issue 2 - Serial Number 11, 1395, Pages 70-80 PDF (450.88 K) | ||
| Authors | ||
| محسن اکبریان1; محمد پاژنگ* 2; علیرضا امانی قدیم3; فرشته سادات یونسی1 | ||
| 1دانشجو/ دانشگاه شهید مدنی آذربایجان | ||
| 2هیآت علمی گروه سلولی مولکولی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان | ||
| 3استادیار/ دانشگاه شهید مدنی آذربایجان | ||
| Abstract | ||
| آنزیم اندوگلوکاناز Cel9A از باکتری آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس (AaCel9A) یک آنزیم گرمادوست بوده و پیوندهای بتا 1 به 4 را در مولکول سلولز به طور اتفاقی هیدرولیز کرده و الیگوساکاریدهایی با سرهای احیا کننده تولید میکند. در این تحقیق ابتدا وکتور pDEST17 حاوی ژن آنزیم AaCel9A جهت بیان پروتئین نوترکیب به میزبان مناسب (اشریشیا کلی سویه BL21) منتقل شده و بعد از بیان، با استفاده از ستون نیکل آگارز خالص گردید. سپس با توجه به تاثیر گذاری pH، دما و کلسیم بر روی فعالیت و پایداری آنزیم، با استفاده از این سه متغییر فعالیت آنزیم با استفاده از روش رویه پاسخ بهینه گردید. نتیجه الکتروفورز ژل SDS-PAGE نشان داد که آنزیم نوترکیب در حدود 59 کیلو دالتون وزن مولکولی داشته و به خوبی بیان و خالص شده است. نتایج روش رویه پاسخ نشان داد که تاثیر pH بر روی فعالیت آنزیم بیشتر از دما، و دما بیشتر از کلسیم بوده و بهینه شرایط فعالیت آنزیم AaCel9A در محیط با 35/6 pH، دمای°C5/64 و غلظت کلسیم برابر با 92/4 مولار است. در نهایت با توجه به همبستگی بالای نتایج آزمایشگاهی و نتایج پیش بینی شده می توان گفت مدل پیشنهادی در این تحقیق برای پیش بینی شرایط بهینه فعالیت آنزیم از صحت بالایی برخوردار است. | ||
| Keywords | ||
| : آلیسیکلوباسیلوس اسیدوکالداریوس; اندوگلوکاناز; تخلیص پروتئین; روش رویه پاسخ. بهینه سازی فعالیت | ||
|
Statistics Article View: 215 PDF Download: 85 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,174 |
| Number of Articles | 24,684 |
| Article View | 25,073,424 |
| PDF Download | 17,774,880 |