بیان نوترکیب بخش C-ترمینال پروتئین Rif1 و محلول سازی آن با سارکوزیل | ||
| زیست فناوری | ||
| Article 8, Volume 12, Issue 1 - Serial Number 28, 1399, Pages 103-118 PDF (627.6 K) | ||
| Document Type: پژوهشی اصیل | ||
| Authors | ||
| حامد غدیری1; ثنا علوی2; بهاره دبیرمنش1; خسرو خواجه* 1 | ||
| 1بخش بیوشیمی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
| 2بخش نانوبیوتکنولوژی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران | ||
| Abstract | ||
| ژنوم یوکاریوتی حاوی چندین محل شروع همانندسازی میباشد. بررسیها نشان میدهد که روند و ترتیب فعال شدن این منشأها با نظم خاصی صورت میگیرد که این فرآیند منظم را اصطلاحاَ زمانبندی همانندسازی (Replication timing) می-گویند. مطالعات اخیر نشان میدهد که فاکتورهای زیادی در تنظیم زمانبندی فرآیند همانندسازی نقش دارند. یکی از مهمترین این فاکتورها پروتئین متصلشونده به Rap1 (Rif1)، میباشد که نقش اساسی را در تنظیم برنامه زمانبندی همانندسازی در مخمر و یوکاریوتهای پیشرفتهتر ایفا میکند. قسمت عمده ساختار این پروتئین به صورت نامنظم بوده و این ویژگیها مانع از بیان Rif1 به صورت پایدار شده و مطالعه بر روی آن را دشوار میکند. هدف از مطالعه کنونی بیان نوترکیب دمین C-ترمینال پروتئین Rif1 موشی (muRif1-CTD) به صورت محلول میباشد. بدین منظور ژن muRif1-CTD از سازه یوکاریوتی حاوی ژن کامل Rif1 به کمک PCR استخراج و در وکتور بیانی pPAL7 که حاوی برچسب Profinity eXact بود، قرار گرفت. محلولسازی پروتئین با استفاده از دترجنتهای مختلف و در مرحله بعد حذف دترجنت با استفاده از دیالیز صورت پذیرفت. به منظور اطمینان از اینکه پروتئین محلول شده دارای فعالیت است آنالیز برهمکنش پروتئین Rif1 با ساختار G4 (که قبلا در رابطه با اتصال به Rif1 معرفی شده بود) با روش ژل شیفت مورد بررسی قرار گرفت. نتایج این بررسی نشان داد که استفاده از دترجنت میتواند برای محلول سازی پروتئین Rif1 بدون اثرگذاری بر مراحل خالصسازی آن مورد استفاده قرار گیرد. لیکن در مورد این پروتئین در صورت فقدان کامل دترجنت، این پروتئین به صورت محلول نخواهد بود. | ||
| Keywords | ||
| پروتئین Rif1; سارکوزیل; محلول سازی; زمانبندی همانندسازی; بیان در سیستمهای پروکاریوتی | ||
| References | ||
|
| ||
|
Statistics Article View: 199 PDF Download: 64 |
||
| Number of Journals | 45 |
| Number of Issues | 2,174 |
| Number of Articles | 24,684 |
| Article View | 25,076,721 |
| PDF Download | 17,776,712 |