دوره 20، شماره 3 - ( 1396 )                   جلد 20 شماره 3 صفحات 33-48 | برگشت به فهرست نسخه ها

XML English Abstract Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Amerian M, Nazarian S. Expression and purification of recombinant chimeric protein contains CtxB and TcpA from Vibrio cholera and investigation of antibody titer in mouse. MJMS. 2017; 20 (3) :33-48
URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-6779-fa.html
عامریان میلاد، نظریان شهرام. بیان و تخلیص پروتئین کایمر نوترکیب دربردارنده CtxB و TcpA از ویبریوکلرا و بررسی تیتر آنتی‌بادی در موش. پژوهش‌های آسیب‌شناسی زیستی. 1396; 20 (3) :33-48

URL: http://journals.modares.ac.ir/article-30-6779-fa.html


1- گروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران
2- گروه زیست شناسی، دانشکده و پژوهشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
چکیده:   (1975 مشاهده)
هدف: عامل کلونیزاسیون پیلی tcpAو توکسین کلرا مهم‌ترین عوامل بیماری‌زایی ویبریو کلرا هستند و توانایی تحریک سیستم ایمنی را دارند. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی، بیان پروتئین کایمر نوترکیب CTXB-TCPA در باکتری اشریشیا کلی و تولید آنتی‌بادی علیه آن در موش بود.
مواد و روش‌ها: کاست ژنی دربردارنده ژن‌های ctxB، tcpAو فاصله‌انداز با روش‌ بیوانفورماتیکی طراحی شد. شاخصه‌هایی از قبیل ساختار پروتئین کایمر و اپی توپ‌ها بررسی شد. برای ساخت کاست ژنی، ژن‌های ctxBو tcpAتکثیر و در ناقل pET28a همسانه‌سازی شدند. بیان ژن‌های ctxB-tcpAدر pET28a(+) تحت القای IPTG انجام شد. پروتئین نوترکیب CTXB-TCPA به روش SDS-PAGE و لکه‌گذاری وسترن تأیید شد. تیتر آنتی‌بادی تولید شده در سرم موش با روش الایزا بررسی شد.
نتایج: شاخص انطباق‌پذیری در ژن بهینه‌سازی شده به 9/0 تغییر کرد. با بهینه‌‌سازی ژنی درصد کدون‌های با ترجیح بالا به 74 درصد افزایش یافت. تحلیل آنزیمی همسانه‌سازی کایمر ژنی ctxB-tcpA در ناقل بیانی pET28a(+) را تأیید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی 35 کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده شد. واکنش پروتئین با آنتی‌بادی ضد سم کلرا در وسترن بلات تأیید شد. میزان پروتئین خالص شده 1/33 میلی‌گرم در لیتر بود. ایمن‌سازی موش‌ها پاسخ آنتی‌بادی سرمی را القا کرد.
نتیجه‌گیری:پروتئین کایمر می‌تواند برای بررسی‌های ایمنی علیه وبا در نظر گرفته شود.
متن کامل [PDF 1419 kb]   (1980 دریافت)    
نوع مقاله: مقاله پژوهشی | موضوع مقاله: میکروبیولوژی
دریافت: ۱۳۹۶/۵/۱۴ | پذیرش: ۱۳۹۶/۷/۱۰ | انتشار: ۱۳۹۶/۸/۱

ارسال نظر درباره این مقاله : نام کاربری یا پست الکترونیک شما:
CAPTCHA